Одностадийный мультиплексный ПЦР-анализ для характеристики комплексов Leishmania Нового Света

Мы разработали ПЦР-анализ для одностадийной дифференциации трех комплексов Leishmania Нового Света (Leishmania braziliensis, Leishmania mexicana и Leishmania donovani). Этот мультиплексный анализ нацелен на повторы гена сплайсированного лидерного РНК-участка (мини-экзона) этих организмов и позволяет одновременно выявлять все три комплекса, формируя продукты разного размера для каждого комплекса. Анализ специфичен для рода Leishmania и не выявляет родственных кинетопластидных простейших, таких как Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei и Crithidia fasciculata. Он правильно идентифицировал виды Leishmania, широко распространенные в Центральной и Южной Америке. Чувствительность ПЦР-амплификации варьировала от 1 фг до 10 пг ДНК (от 0,01 до 100 паразитов) в зависимости от выявляемого комплекса. Неочищенные экстракты культивируемых паразитов, полученные простым кипячением разведенных культур, служили отличными матрицами для амплификации. Также были исследованы неочищенные препараты клинического материала. Анализ выявлял L. braziliensis в соскобах кожи из очагов кожного лейшманиоза, Leishmania chagasi в соскобах кожи при атипичном кожном лейшманиозе и L. mexicana в аспиратах очагов у инфицированных хомяков. Мы минимизировали требования к количеству материала и максимально упростили, ускорили анализ и повысили информативность его результатов, сделав метод пригодным для использования в лабораториях стран, эндемичных по лейшманиозу. Этот анализ должен быть полезен для быстрой идентификации паразитов Leishmania в странах эндемичных регионов, особенно там, где в одной географической области встречаются разные комплексы Leishmania.