Идентификация биологически активных пептидов в гипоаллергенных заменителях грудного молока с использованием CE‑TOF‑MS с поддержкой полуэмпирической модели электромиграционного поведения

Биологически активные пептиды, полученные из сложных гидролизатов белков коровьего молока, представляют особый интерес в пищевой науке и нутрициологии, поскольку показано, что они выполняют различные физиологические функции и приносят пользу здоровью человека. В данном исследовании мы использовали капиллярную электрофорезу в сочетании с масс-спектрометрией времени пролета (CE‑TOF‑MS) для разделения и идентификации биологически активных пептидов в трех гипоаллергенных заменителях грудного молока. Соответствующая очистка образцов с использованием цитратного буфера с дитиотреитолом (DTT) и мочевиной с последующей твердофазной экстракцией (SPE) на картриджах Sep‑Pak® C18 и StrataX™ позволила обнаружить большое количество низкомолекулярных биологически активных пептидов. Эта предварительная идентификация основывалась исключительно на измеренных экспериментальных моноизотопных значениях молекулярной массы (M(exp)). Затем мы оценили классические полуэмпирические соотношения между электрофорезной подвижностью и отношением заряда к массе (m(e) vs. q/M(α), α = 1/2 для классической полимерной модели) для описания их миграционного поведения. Применение прогнозирования миграции оказалось полезным для повышения надежности идентификации, предотвращения неправильных интерпретаций и разрешения некоторых конфликтов тождественности. После пересмотра были подтверждены тождества 24, 30 и 38 биологически активных пептидов в каждом из трех заменителей соответственно. Существенное число этих пептидов было описано как ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента (АПФ), однако также подтверждена наличие последовательностей с другими биологическими активностями — антигипертензивной, антитромботической, гипохолестеринемической, иммуномодулирующей, цитотоксической, антиоксидантной, антимикробной, антигенной или опиоидной.