Редактирование генома Penicillium chrysogenum на основе CRISPR/Cas9

Системы на основе CRISPR/Cas9 зарекомендовали себя как универсальные платформы для точного редактирования генома в широком спектре организмов. В настоящей работе разработаны мощные инструменты CRISPR/Cas9 для модификаций генома с использованием маркеров и без них в Penicillium chrysogenum, модельном нитчатом грибе и промышленно значимой клеточной фабрике. Созданный набор инструментов CRISPR/Cas9 отличается высокой гибкостью и позволяет редактировать новые мишени с минимальными клонировочными усилиями. Белок Cas9 и sgRNA могут доставляться при трансформации в виде предварительно собранных рибонуклеопротеинов CRISPR–Cas9 (RNP) или экспрессироваться внутри клетки с плазмиды на основе AMA1. Прямая доставка белка Cas9 вместе с синтезированной in vitro sgRNA в клетки обеспечивает транситорный метод геномного инжиниринга, который может быть быстро применим к другим нитчатым грибам. Показано, что экспрессия Cas9 с вектора на основе AMA1 является высокоэффективной для безмаркёрных делеций генов.