Epi-CHO — эписомная система экспрессии для получения рекомбинантных белков в клетках CHO

В исследовании описана разработка системы транзиторной экспрессии для клеток яичника китайского хомячка (CHO), основанной на автономной репликации и сохранении трансфицированной плазмидной ДНК. Система транзиторной экспрессии, обеспечивающая внехромосомную амплификацию плазмид, позволяет сохранять большее число копий плазмид в трансфицированной клетке на протяжении производственной фазы, что приводит к значительному повышению экспрессии трансгена. Система экспрессии, получившая название Epi-CHO, включает (1) линию клеток CHO-K1, стабильно трансфицированную геном большого T-антигена (LT) полиомавируса (Py) (PyLT), и (2) вектор экспрессии ДНК pPyEBV, кодирующий начало репликации Py (PyOri) для автономной амплификации плазмиды, а также ядерный антиген 1 вируса Эпштейна—Барр (EBV) (EBNA-1) и OriP для удержания плазмиды. Линия клеток CHO-K1, экспрессирующая PyLT и получившая название CHO-T, была адаптирована к росту в суспензии в бессывороточной среде для облегчения крупномасштабной транзиторной трансфекции и экспрессии рекомбинантных генов. Зеленый флуоресцентный белок, усиленный вариант (EGFP), и гормон роста человека (hGH) использовали в качестве репортерных белков для демонстрации экспрессии трансгена и продуктивности. Трансфекция суспензионно растущих клеток CHO-T вектором pPyEBV, кодирующим hGH, привела к конечной концентрации hGH 75 мг л(-1) в супернатантах культуры через 11 дней после трансфекции.