AFLP: новый метод генетической дактилоскопии ДНК

Описан новый метод генетической дактилоскопии ДНК, получивший название AFLP. Метод AFLP основан на селективной ПЦР-амплификации рестрикционных фрагментов из полного рестрикционного гидролизата геномной ДНК. Метод включает три этапа: (i) рестрикцию ДНК и лигирование олигонуклеотидных адаптеров, (ii) селективную амплификацию наборов рестрикционных фрагментов и (iii) гель-анализ амплифицированных фрагментов. ПЦР-амплификация рестрикционных фрагментов осуществляется с использованием последовательностей адаптера и сайта рестрикции в качестве участков связывания праймеров. Селективность амплификации достигается применением праймеров, выступающих в рестрикционные фрагменты, при этом амплифицируются только те фрагменты, в которых продолжения праймеров соответствуют нуклеотидам, фланкирующим сайты рестрикции. С помощью этого метода наборы рестрикционных фрагментов можно визуализировать методом ПЦР без знания нуклеотидной последовательности. Метод позволяет специфично коамплифицировать большое число рестрикционных фрагментов. Однако количество фрагментов, которые можно одновременно анализировать, зависит от разрешения системы детекции. Как правило, на денатурирующих полиакриламидных гелях амплифицируют и детектируют 50–100 рестрикционных фрагментов. Метод AFLP представляет собой новый и чрезвычайно мощный метод генетической дактилоскопии ДНК любого происхождения и любой сложности.