Высокоразрешающая двухмерная электрофорез белков

Разработана методика разделения белков с помощью двухмерного полиакриламидного гель-электрофореза. Благодаря разрешающей способности и чувствительности эта методика является мощным инструментом для анализа и обнаружения белков из сложных биологических источников. Белки разделяются по изоэлектрической точке методом изоэлектрического фокусирования в первом измерении и по молекулярной массе методом электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия (SDS) во втором измерении. Поскольку эти два параметра не коррелируют, возможно получить почти равномерное распределение белковых точек на двумерном геле. С помощью этой методики разрешено 1100 различных компонентов из Escherichia coli и, по оценке, можно разрешить максимум до 5000 белков. Белок, содержащий всего одну распад в минуту (disintegration per min) либо 14C, либо 35S, может быть обнаружен авторентгенографией. Белок, составляющий 10^-4–10^-5% от общего белка, может быть обнаружен и количественно определён авторентгенографией. Воспроизводимость разделения достаточна для того, чтобы каждая точка на одном разделении могла быть сопоставлена с точкой на другом разделении. Эта методика даёт способ оценки (при указанных чувствительностях) числа белков, синтезируемых любой биологической системой. Система способна разрешать белки, отличающиеся единичным зарядом, и, следовательно, может применяться для анализа in vivo модификаций, приводящих к изменению заряда. Белки, чей заряд изменён в результате миссенс-мутаций, могут быть идентифицированы. Представлено подробное описание методов и характеристик этой системы.