Получение большого количества дендритных клеток из культур костного мозга мыши с добавлением гранулоцитарно/макрофагального колониестимулирующего фактора.

Известно, что из костного мозга развиваются антигенпредставляющие дендритные клетки, богатые продуктами главного комплекса гистосовместимости (MHC) класса II. Однако в костном мозге отсутствуют зрелые дендритные клетки, и значительные популяции пролиферирующих, менее зрелых клеток до сих пор не были идентифицированы. Методика индукции роста дендритных клеток, недавно описанная для крови мышей, была модифицирована для MHC класса II-негативных предшественников в костном мозге. Важным этапом является удаление большинства ненадёжно адгезированных недавно образовавшихся гранулоцитов путём мягких промывок в течение первых 2–4 дней культуры. Это оставляет пролиферирующие кластеры, слабо прилежащие к более прочно адгезированному «строме». На 4–6-е дни кластеры можно сдёрнуть, выделить методом седиментации при 1 g и при рекультивировании получить большое количество дендритных клеток. Последние легко идентифицируются по характерной форме, ультраструктуре и набору антигенов, обнаруживаемых панелью моноклональных антител. Дендритные клетки экспрессируют высокий уровень продуктов MHC класса II и выступают в роли мощных вспомогательных клеток для инициации реакции смешанных лейкоцитов. Ни кластеры, ни зрелые дендритные клетки не образуются при применении фактора колоний макрофагов вместо гранулоцитарно/макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF). Следовательно, GM-CSF индуцирует все три миелоидные линии клеток (гранулоциты, макрофаги и дендритные клетки). Поскольку более чем 5 x 10(6) дендритных клеток развиваются за 1 неделю из предшественников в крупных костях задних конечностей одного животного, предшественники костного мозга могут служить значительным источником дендритных клеток. Эта особенность должна оказаться полезной для будущих молекулярных и клинических исследований этого в противном случае редкого типа клеток.