Однореакторный биосинтез гликопротеинов с использованием бесклеточной системы транскрипции и трансляции, обогащённой аппаратурой гликозилирования

Развивающееся направление бактериальной гликоинженерии сделало возможным получение целевых гликанов и гликоконъюгатов для использования в качестве вакцин и терапевтических средств. Однако получение гомогенных гликопротеинов на основе клеточных систем по-прежнему представляет значительную проблему из-за ограничений, связанных с жизнеспособностью клеток, и невозможности контролировать компоненты гликозилирования in vivo в точно заданных соотношениях. Для решения этих проблем мы описываем новую технологию бесклеточного синтеза гликопротеинов (CFGpS), которая непосредственно интегрирует биосинтез белка с N-связанным гликозилированием белков. Эта технология использует гликооптимизированный штамм Escherichia coli для получения клеточных экстрактов, селективно обогащённых компонентами гликозилирования, включая олигосахарилтрансферазы (OST) и олигосахариды, связанные с липидами (LLO). Полученные экстракты обеспечивают проведение однореакторной реакции для эффективного и сайт-специфичного гликозилирования целевых белков. Платформа CFGpS обладает высокой модульностью, позволяя использовать множество различных OST и структурно разнообразных LLO. Поэтому мы ожидаем, что CFGpS будет способствовать фундаментальному пониманию гликонауки и сделает возможными применения для биопроизводства гликопротеинов по требованию.